用组织分离法制备灵芝母种要点
1、配制母种培养基：具体方法在前面已有讲述，在此不作赘述。经过灭菌的试管在接种之前，要进行无菌检查，即随机取出几支空白培养基试管在25℃的恒温下培养2～3天，斜面上没有杂菌发生，证明灭菌彻底。
2、种芝选择：用来进行组织分离的灵芝子实体，要选择出芝早、菌体粗壮、生长旺盛、具有本品种典型特性的个体。在灵芝发育到五六成熟时采收，此时灵芝菌盖刚开片，子实体呈现橘黄色，外观鲜嫩，色泽均匀，无病态及畸形等。
3、组织分离：把采回的种芝及时放入接种箱内，用甲醛熏蒸消毒，在接种箱内把种芝放入0.1％的升汞溶液中浸泡1～2分钟，取出后放入无菌水中清洗，用灭过菌的脱脂棉吸去表面水分，再用解剖刀把灵芝菌盖表层切去，在菌盖和菌柄连接部位切取绿豆粒大小的组织块，迅速接种在灭菌试管的斜面培养基上，并及时塞好棉塞。每个种芝可接8～10支试管。
4、恒温培养：接种组织块的试管置于25℃～28℃的恒温箱内培养。3～4天后，组织块上开始出现白色绒毛状菌丝，此时及时挑出不发菌丝或受到污染的试管，剩下的继续在恒温箱内培养，直至菌丝发满试管。然后挑选出菌丝洁白、生长势旺的试管，在无菌条件下再转入新的试管中，在25℃～27℃的温度下培养5～7天，菌丝发满，即得灵芝母种。最后挑出颜色均匀一致、菌丝长势旺盛的母种，用黑色纸包好放入冰箱，在0℃～4℃的低温下保存，以备扩大繁殖原种。
