1.实验室要求
萝卜组培中所用实验室需符合GB19489和GB/T22278规定。
2.培养基的选择
萝卜组织培养以MS培养基为基础培养基，所用药品符合国家相关规定。
3.培养基的制备
（1）MS培养基母液的配制和保存
将培养基配方扩大若干倍，一般为（10～100）倍的浓缩液体。药品配制严格按照GB/T603规定方法配制；所用水应符合GB/T6682的要求。为了避免药品交叉污染，称取药品使用的钥匙必须专药专用。培养基母液配置的倍数通常为：大量元素母液，20倍液；微量元素母液，200倍液；铁盐母液，200倍液；有机物质母液，200倍液。将配制好的母液分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数和日期，贮存在2～4℃的冰箱中，贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。
（2）植物生长调节剂母液配制和保存
多数植物生长调节剂难溶于水，其溶解方法：NAA先用少量95%的乙醇溶解，然后加热溶解，再加蒸馏水定容。6-BA先用少量1mol/L盐酸溶解，再加蒸馏水定容。所用水要符合GB/T6682的要求。配制好植物生长调节剂分别贴上标签，标签写上名称、配制浓度和日期，贮存在2～4℃的冰箱中，贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。
（3）培养基的配制
培养基由MS基础培养基、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水分别符合GB317和GB5749规定；所需蔗糖浓度30g/L，琼脂粉浓度7g/L。培养基配制的具体过程为：在搪瓷缸中加入700ml蒸馏水和30g蔗糖，搅拌溶解，加入7g琼脂粉，放在电炉上加热，不断搅拌至沸腾。在烧杯中加入一定量的大量元素、微量元素、铁盐、有机元素和生长调节物质。等搪瓷缸中的溶液沸腾后，将烧杯中的溶液倒入搪瓷缸中，定容至1L。利用NaOH、HCI调整培养基PH值为5.8-6.0。然后将培养基趁热分装到培养容器（如三角瓶、培养皿）中。分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。装后用封口材料扎口后，写上培养基种类，准备灭菌。注意不能放置时间过长，以免产生污染。
①种子萌发培养基：1/2MS+6-BA0+NAA0，按照培养基配制程序配制。
②诱导培养基：MS+6-BA1.5~2+NAA0.5~1，按照培养基配制程序配制。
③壮苗及生根培养基:1/2MS+6-BA0+NAA0，按照培养基配制程序配制。
4.灭菌
（1）培养基灭菌。
培养基用高温高压灭菌法。打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的培养器皿，连同接种用具等其他待用物品放人锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，利用高温高压灭菌锅进行灭菌。灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持15～20min进行灭菌。灭菌后，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。
（2）环境灭菌
对环境进行定期灭菌。方法是用75%乙醇或0.1%新吉尔灭进行喷洒；对无菌操作室（接种室）、培养室和准备室采用紫外灯灭菌方法；接种所用的超净工作台在空气过滤灭菌的基础上再配合使用紫外灯照射灭菌20～30min，再用75%乙醇对超净工作台表面进行擦拭。
（3）接种工具灭菌
接种用的工具、无菌水等必须在灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持15～20min进行灭菌。
（4）萝卜种子消毒
萝卜种子消毒采用化学灭菌法。萝卜种子用水清洗后用滤纸吸干，放入灭菌过的超净工作台。将种子在5%的次氯酸钠中浸泡10分钟，用无菌水冲洗3~5次。
5.无菌外植体的获取
在超净工作台内，用无菌镊子将灭菌萝卜种子播到种子萌发培养基上，每个三角瓶播种4~5粒。播种后，暗培养4~5d；然后将伸长的下胚轴在无菌的条件下切成5mm~10mm的小段外植体。
6.诱导不定芽
在无菌的条件下，将上述5中获得的萝卜下胚轴小段外植体放入诱导培养基中，诱导形成不定芽点。培养温度为25±2℃，光照时间16h/d，光照强度2000～3000lx。
7.生长培养
在无菌条件下，将上述6中获得的带有不定芽点的愈伤组织转移到不定芽生长培养基中，进行不定芽的生长培养。培养温度为25±2℃，光照时间16h/d，光照强度2000~3000lx。
8.生根培养
在无菌条件下，将上述8中获得的不定芽切割成单株，种到生根培养基上进行生根培养；培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000~3000lx。培养大约20d后得到根系完整的萝卜组培苗。
